豬肝微粒體是藥物代謝酶研究、體外代謝穩(wěn)定性評(píng)價(jià)及藥物-藥物相互作用篩查的關(guān)鍵生物材料，制備質(zhì)量直接影響酶活性、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性與數(shù)據(jù)可靠性。
豬肝微粒體為肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)碎片，富含Ⅰ相代謝酶，需通過低溫勻漿、差速離心與超速離心等步驟從新鮮豬肝中分離獲得。應(yīng)嚴(yán)格遵循快速處理、全程低溫、無菌操作、避免溶血四大原則，才能獲得高活性、低雜質(zhì)的微粒體樣品。
一、原料選擇與預(yù)處理
肝臟來源與保存：
選用健康屠宰豬的新鮮肝臟，剔除結(jié)締組織、血管及膽管；
立即浸入預(yù)冷含0.1MKCl或蔗糖的緩沖液，冰上運(yùn)輸；
清洗與稱重：
用冰冷生理鹽水反復(fù)沖洗至無血水，吸干表面水分后稱重（通常10–50g/批次）。
二、組織勻漿與初步破碎
低溫勻漿：
按1:3加入預(yù)冷勻漿緩沖液，使用玻璃/Teflon勻漿器在冰浴中勻漿10–15次；
避免泡沫與過熱：
勻漿過程保持溫度＜4℃，防止酶變性；禁止高速攪拌產(chǎn)生氣泡導(dǎo)致蛋白氧化。
三、差速離心純化
低速離心去核與碎片：
9,000×g，4℃，離心20分鐘，棄沉淀；
超速離心收集微粒體：
上清液轉(zhuǎn)移至超速離心管，100,000×g，4℃，離心60–90分鐘；
小心棄上清（胞質(zhì)蛋白），管底白色/淺黃色沉淀即為粗微粒體。
四、微粒體重懸與保存
重懸緩沖液選擇：
用含20%甘油的50mM磷酸鉀緩沖液輕柔吹打重懸，甘油可保護(hù)膜結(jié)構(gòu)，–80℃長期保存；
蛋白濃度測定：
采用Bradford或BCA法測定蛋白含量，通常調(diào)整至5–20mg/mL用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；
分裝凍存：
分裝至無菌EP管，避免反復(fù)凍融，–80℃可穩(wěn)定保存6–12個(gè)月。
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更新時(shí)間：2026-03-23
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